АНАЛИЗ ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЙ ЭКСПРЕССИИ МАРКЕРА АПОПТОЗА P-53 ПАХОВОГО ЛИМФАТИЧЕСКОГО УЗЛА У КРЫС В ПОСТТРАВМАТИЧЕСКОМ ПЕРИОДЕ

ВВЕДЕНИЕ. Изучение распределения p53-позитивных клеток в различных зонах лимфоузла необходимо для понимания системных последствий травмы и поиска потенциальных мишеней терапии.

ЦЕЛЬ: оценить динамику численной плотности p53-позитивных лимфоцитов в различных структурно-функциональных зонах пахового лимфатического узла у крыс после механической травмы мягких тканей бедра.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Эксперимент выполнен на 50 беспородных крысах (масса 180–200 г). Животные распределены на 5 групп: контроль (n=10) и 4 опытные (n=40) – сроки наблюдения 1, 3, 7 и 14 суток после травмы. Механическую травму бедра наносили с использованием специальной установки, моделирующей высокоэнергетическое повреждение. Иммуногистохимическое выявление p53 проводили на парафиновых срезах лимфоузлов с применением системы детекции UltraVision ONE. Статистический анализ проведен в среде R (версия 4.3.2) с использованием непараметрических методов: критерий Краскела-Уоллиса, критерий Манна–Уитни с поправкой Бонферрони, критерий Фридмана, тест Джонкхира–Терпстры и двухфакторный дисперсионный анализ на выровненных рангах (ART).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. Во всех зонах, за исключением первичных узелков и мозгового синуса, выявлено статистически значимое увеличение плотности p53-позитивных лимфоцитов в посттравматическом периоде (p<0,05; d Коэна >1,5). Наибольшие абсолютные значения зафиксированы в мозговых тяжах на всех сроках, минимальные – в синусной системе и первичных узелках. Критерий Фридмана подтвердил гетерогенность распределения p53 между зонами во все сроки. Тест Джонкхира–Терпстры выявил линейный положительный тренд в мозговых тяжах, вторичных узелках и субкапсулярном синусе, что указывает на прогрессирующее накопление p53⁺клеток. В корковом веществе и паракортикальной зоне наблюдался квадратичный тренд с пиком на 3–7 сутки. Установлено значимое взаимодействие факторов «время» и «зона», подтверждающее зональную специфичность реакции. Мощность исследования превысила 0,80 для большинства сравнений.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ. Механическая травма бедра у крыс индуцирует выраженную и зонально-специфичную динамику экспрессии p53 в паховом лимфоузле. Максимальная и прогрессирующая апоптотическая активность в мозговых тяжах, субкапсулярном синусе и вторичных узелках отражает ключевую роль этих зон в элиминации активированных лимфоцитов и завершении иммунного ответа. Полученные данные расширяют фундаментальные представления о реакции лимфоидной ткани на травму и могут служить основой для разработки методов коррекции посттравматических иммунных нарушений.

1. Ragu S, Matos-Rodrigues G, Lopez BS. Replication Stress, DNA Damage, Inflammatory Cytokines and Innate Immune Re-sponse. Genes (Basel). 2020 Apr 9;11(4):409. https://doi.org/10.3390/genes11040409. PMID: 32283785; PMCID: PMC7230342.

2. Willaume S, Rass E, Fontanilla-Ramirez P, Moussa A, Wanschoor P, Bertrand P. A Link between Replicative Stress, Lamin Proteins, and Inflammation. Genes (Basel). 2021 Apr 9;12(4):552. https://doi.org/10.3390/genes12040552. PMID: 33918867; PMCID: PMC8070205.

3. Wu Z, Wang S, Xue P, Wang S, Wang G, Zhang W. Inhibitory member of the apoptosis-stimulating protein of p53 is overex-pressed in bladder cancer and correlated to its progression. Medicine (Baltimore). 2017 May;96(19):e6640. https://doi.org/10.1097/MD.0000000000006640. PMID: 28489738; PMCID: PMC5428572.

4. Ibrahiem AT, Makhdoom AK, Alanazi KS, Alanazi AM, Mukhlef AM, Elshafey SH, Toraih EA, Fawzy MS. Analysis of anti-apoptotic PVT1 oncogene and apoptosis-related proteins (p53, Bcl2, PD-1, and PD-L1) expression in thyroid carcinoma. J Clin Lab Anal. 2022 May;36(5):e24390. https://doi.org/10.1002/jcla.24390. Epub 2022 Apr 7. PMID: 35388548; PMCID: PMC9102754.

5. Cha YJ, Kim HR, Lee CY, Cho BC, Shim HS. Clinicopathological and prognostic significance of programmed cell death lig-and-1 expression in lung adenocarcinoma and its relationship with p53 status. Lung Cancer. 2016 Jul;97:73-80. https://doi.org/10.1016/j.lungcan.2016.05.001. Epub 2016 May 3. PMID: 27237031.

6. Chen S, Wu J, Zhong S, Li Y, Zhang P, Ma J, Ren J, Tan Y, Wang Y, Au KF, Siebold C, Bond GL, Chen Z, Lu M, Jones EY, Lu X. iASPP mediates p53 selectivity through a modular mechanism fine-tuning DNA recognition. Proc Natl Acad Sci U S A. 2019 Aug 27;116(35):17470-17479. https://doi.org/10.1073/pnas.1909393116. Epub 2019 Aug 8. PMID: 31395738; PMCID: PMC6717262.

7. Ahn J, Byeon IL, Byeon CH, Gronenborn AM. Insight into the structural basis of pro- and antiapoptotic p53 modulation by ASPP proteins. J Biol Chem. 2009 May 15;284(20):13812-13822. https://doi.org/10.1074/jbc.M808821200. Epub 2009 Feb 26. PMID: 19246451; PMCID: PMC2679482.

8. Miller P, Akama-Garren EH, Owen RP, Demetriou C, Carroll TM, Slee E, Al Moussawi K, Ellis M, Goldin R, O'Neill E, Lu X. p53 inhibitor iASPP is an unexpected suppressor of KRAS and inflammation-driven pancreatic cancer. Cell Death Differ. 2023 Jul;30(7):1619-1635. https://doi.org/10.1038/s41418-023-01168-3. Epub 2023 Jun 3. PMID: 37270580; PMCID: PMC10307949.

9. Dong P, Ihira K, Hamada J, Watari H, Yamada T, Hosaka M, Hanley SJ, Kudo M, Sakuragi N. Reactivating p53 functions by suppressing its novel inhibitor iASPP: a potential therapeutic opportunity in p53 wild-type tumors. Oncotarget. 2015 Aug 21;6(24):19968-75. https://doi.org/10.18632/oncotarget.4847. PMID: 26343523; PMCID: PMC4652980.

10. Lu M, Breyssens H, Salter V, Zhong S, Hu Y, Baer C, Ratnayaka I, Sullivan A, Brown NR, Endicott J, Knapp S, Kessler BM, Middleton MR, Siebold C, Jones EY, Sviderskaya EV, Cebon J, John T, Caballero OL, Goding CR, Lu X. Restoring p53 function in human melanoma cells by inhibiting MDM2 and cyclin B1/CDK1-phosphorylated nuclear iASPP. Cancer Cell. 2013 May 13;23(5):618-33. https://doi.org/10.1016/j.ccr.2013.03.013. Epub 2013 Apr 25. Erratum in: Cancer Cell. 2016 Nov 14;30(5):822-823. https://doi.org/10.1016/j.ccell.2016.09.019. PMID: 23623661.

11. Morral C, Ayyaz A, Kuo HC, Fink M, Verginadis II, Daniel AR, Burner DN, Driver LM, Satow S, Hasapis S, Ghinnagow R, Luo L, Ma Y, Attardi LD, Koumenis C, Minn AJ, Wrana JL, Lee CL, Kirsch DG. p53 promotes revival stem cells in the regenerating intestine after severe radiation injury. Nat Commun. 2024 Apr 8;15(1):3018. https://doi.org/10.1038/s41467-024-47124-8. PMID: 38589357; PMCID: PMC11001929.

12. Gurley KE, Ashley AK, Moser RD, Kemp CJ. Synergy between Prkdc and Trp53 regulates stem cell proliferation and GI-ARS after irradiation. Cell Death Differ. 2017 Nov;24(11):1853-1860. https://doi.org/10.1038/cdd.2017.107. Epub 2017 Jul 7. PMID: 28686579; PMCID: PMC5635213.

13. Reddy DV, Chattopadhyay A, Vathulya M, Dhingra M. Prognostic significance of biomarker expression on immunohisto-chemistry for overall survival in osteosarcoma: An overview of systematic reviews. J Clin Orthop Trauma. 2025 Nov 12;72:103264. https://doi.org/10.1016/j.jcot.2025.103264. PMID: 41322978; PMCID: PMC12664387.

14. Shao X, Yang X, Shen J, Chen S, Jiang X, Wang Q, Di Q. TNF-α-induced p53 activation induces apoptosis in neurological in-jury. J Cell Mol Med. 2020 Jun;24(12):6796-6803. https://doi.org/10.1111/jcmm.15333. Epub 2020 Apr 28. PMID: 32344470; PMCID: PMC7299703.

15. Raghupathi R, Graham DI, McIntosh TK. Apoptosis after traumatic brain injury. J Neurotrauma. 2000 Oct;17(10):927-38. https://doi.org/10.1089/neu.2000.17.927. PMID: 11063058.

16. Patent RUS № 2807925/21.11.23. Byul. № 33. Lanicheva AKh, Semchenko VV, Murzabaev KhKh, Imaeva AK. A device for simulating mechanical trauma in adult laboratory rats, comparable to a gunshot wound from a 5.6 mm caliber bullet. Avail-able from:https://patentimages.storage.googleapis.com/66/c6/cd/e7525fdc63c260/RU2807925C1.pdf (In Russ.)

17. Plesnila N, von Baumgarten L, Retiounskaia M, Engel D, Ardeshiri A, Zimmermann R, Hoffmann F, Landshamer S, Wagner E, Culmsee C. Delayed neuronal death after brain trauma involves p53-dependent inhibition of NF-kappaB transcriptional ac-tivity. Cell Death Differ. 2007 Aug;14(8):1529-41. https://doi.org/10.1038/sj.cdd.4402159. Epub 2007 Apr 27. PMID: 17464322.

18. Wang Y, Dong XX, Cao Y, Liang ZQ, Han R, Wu JC, Gu ZL, Qin ZH. p53 induction contributes to excitotoxic neuronal death in rat striatum through apoptotic and autophagic mechanisms. Eur J Neurosci. 2009 Dec;30(12):2258-70. https://doi.org/10.1111/j.1460-9568.2009.07025.x. Epub 2009 Dec 10. PMID: 20092569.

19. Eldadah BA, Faden AI. Caspase pathways, neuronal apoptosis, and CNS injury. J Neurotrauma. 2000 Oct;17(10):811-29. https://doi.org/10.1089/neu.2000.17.811. PMID: 11063050.

20. Bredesen DE. Apoptosis: overview and signal transduction pathways. J Neurotrauma. 2000 Oct;17(10):801-10. https://doi.org/10.1089/neu.2000.17.801. PMID: 11063049.

21. Maor-Nof M, Shipony Z, Lopez-Gonzalez R, Nakayama L, Zhang YJ, Couthouis J, et al. p53 is a central regulator driving neu-rodegeneration caused by C9orf72 poly(PR). Cell. 2021 Feb 4;184(3):689-708.e20. https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.12.025. Epub 2021 Jan 21. PMID: 33482083; PMCID: PMC7886018.