ВЛИЯНИЕ ЦИКЛОСПОРИНА А НА ФИБРОБЛАСТЫ ТЕНОНОВОЙ КАПСУЛЫ ЧЕЛОВЕКА: ИССЛЕДОВАНИЕ IN VITRO

Анализ механизма действия циклоспорина А позволяет предположить, что местное пролонгированное применение этого иммунодепрессанта в хирургии глаукомы может повысить эффективность вмешательств. С целью оценки антипролиферативного эффекта и возможной цитотоксичности циклоспорина А для фибробластов теноновой капсулы человека, являющихся главным источником формирования рубца при заживлении послеоперационной раны, указанные клетки культивировали в питательной среде с добавлением препарата циклоспорина А до получения концентраций 0,05-2,00 мкг/мл в течение 7 дней. Группой контроля служили культуры фибробластов теноновой капсулы глазного яблока человека без добавления лекарственных препаратов.  Антипролиферативную активность фибробластов оценивали с помощью определения плотности монослоя, индекса пролиферации, времени удвоения культуры и количества удвоений культуры. Для оценки цитотоксичности анализировали культуры, окрашенные трипановым синим, суданом IV и гематоксилином. Количественную оценку доли поврежденных клеток в культурах производили с помощью их окраски набором флуорофоров «Live/Dead». Также определяли ядерно-цитоплазматическое отношение. В результате исследования установлено, что в фазу логарифмического роста культур степень увеличения плотности монослоя находилась в обратной зависимости от концентрации препарата с коэффициентом корреляции Спирмена равным 0,9. Также была выявлена сильная корреляция между значениями индекса пролиферации, временем удвоения культуры, количеством удвоений культуры и концентрацией препарата в питательной среде. Ни в одной из исследуемых культур доля поврежденных клеток не превышала 5% и не была статистически значимо выше значений, полученных для контрольной группы. Таким образом, пролонгированное применение циклоспорина А оказывает дозозависимый антипролиферативный эффект на фибробласты теноновой капсулы человека в пределах концентраций 0,05-2,0 мкг/мл без выраженной цитотоксичности.

1. Petrov SYu. Sovremennaya kontseptsiya bor'by s izbytochnym rubtsevaniem posle fistuliziruyushchey khirurgii glaukomy. Protivovospalitel'nye preparaty i novye tendentsii. Oftal’mologiya. 2017;14(2):99-105. DOI:10.18008/1816-5095-2017-2-99-105

2. Holló G. Wound Healing and Glaucoma Surgery: Modulating the Scarring Process with Conventional Antimetabolites and New Molecules. Glaucoma Surgery. 2017:80-89. DOI:10.1159/000458488

3. Zada M, Pattamatta U, White A. Modulation of Fibroblasts in Conjunctival Wound Healing. Ophthalmology. 2018;125(2):179-192. DOI:10.1016/j.ophtha.2017.08.028

4. Bikbov MM, Babushkin AE, Orenburkina OI. Sovremennye vozmozhnosti profilaktiki izbytochnogo rubtsevaniya posle antiglaukomnykh operatsiy s ispol'zovaniem antimetabolitov. Natsional'nyy zhurnal glaucoma. 2019;18(3):55–60. DOI:10.25700/NJG.2019.03.06

5. Masoumpour M, Nowroozzadeh M, Razeghinejad M. Current and Future Techniques in Wound Healing Modulation after Glaucoma Filtering Surgeries. Open Ophthalmol J. 2016;10:68-85. DOI:10.2174/1874364101610010068

6. Faulds D, Goa KL, Benfield P. Cyclosporin. A review of its pharmacodynamic and pharmacokinetic properties, and therapeutic use in immunoregulatory disorders. Drugs. 1993;45(6):953-1040.

7. Doersch KM, DelloStritto DJ, Newell-Rogers MK. The contribution of interleukin-2 to effective wound healing. Exp Biol Med (Maywood). 2017;242(4):384-396. DOI: 10.1177/1535370216675773

8. Khan SH, Martin MD, Starbeck-Miller GR, Xue HH, Harty JT, Badovinac VP. The Timing of Stimulation and IL-2 Signaling Regulate Secondary CD8 T Cell Responses. PLoS Pathog. 2015;11(10):e1005199. DOI:10.1371/journal.ppat.1005199

9. Leonardi A, DeFranchis G, Fregona IA, Violato D, Plebani M, Secchi AG. Effects of Cyclosporin A on Human Conjunctival Fibroblasts. Arch Ophthalmol. 2001;119(10):1512–1517. DOI: 10.1001/archopht.119.10.1512

10. Viveiros MMH, Kakizaki FY, Hércules LA. In vitro study of cyclosporine A 0.05 % on primary and recurrent pterygium fibroblasts. Int Ophthalmol. 2016;36:237–242. DOI:10.1007/s10792-015-0106-2

11. Tang-Liu DD, Acheampong A. Ocular pharmacokinetics and safety of ciclosporin, a novel topical treatment for dry eye. Clin Pharmacokinet. 2005;44(3):247-61. DOI: 10.2165/00003088-200544030-00003

12. Garweg JG, Wegmann-Burns M, Goldblum D. Effects of daunorubicin, mitomycin C, azathioprine and cyclosporin A on human retinal pigmented epithelial, corneal endothelial and conjunctival cell lines. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 2006;244(3):382-389. DOI: 10.1007/s00417-005-0017-4

13. Trelford CB, Denstedt JT, Armstrong JJ, Hutnik CML. The Pro-Fibrotic Behavior of Human Tenon's Capsule Fibroblasts in Medically Treated Glaucoma Patients. Clin Ophthalmol. 2020;14:1391-1402. DOI: 10.2147/OPTH.S245915

14. Grinberg KN, Kukharenko VI. Metody kul'tivirovaniya kletok. Leningrad: Nauka, 1987.- S. 250-257.