ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ИСКУССТВЕННОЙ АКТИВАЦИИ ООЦИТОВ ИОНОФОРАМИ КАЛЬЦИЯ В ПРОГРАММАХ ВРТ У ПАЦИЕНТОВ С НЕБЛАГОПРИЯТНЫМ РЕПРОДУКТИВНЫМ АНАМНЕЗОМ: ЭМБРИОЛОГИЧЕСКИЕ И КЛИНИЧЕСКИЕ ИСХОДЫ

Актуальность. Компетентность ооцита является определяющим фактором успешного оплодотворения и развития эмбриона. Низкое качество ооцитов может приводить к отсутствию оплодотворения или остановке развития эмбрионов in vitro. Для преодоления недостаточной активации ооцитов у пациенток с неудачами оплодотворения и неудовлетворительным качеством эмбрионов в анамнезе предлагается проведение искусственной активации ооцитов с помощью ионофоров кальция (АОА). Анализ эффективности использования данной технологии представляет интерес для специалистов фундаментальной медицины, а также клиник вспомогательных репродуктивных техно-логий (ВРТ).
Цель исследования: оценить эффективность активации ооцитов ионофором Ca²⁺ на эмбриологическом этапе про-грамм ВРТ у пациентов с предыдущими неудачными попытками лечения бесплодия.
Материалы и методы. Проведено ретроспективное когортное сравнительное исследование на базе ЗАО «Клинический госпиталь "Мать и дитя"» (Самара) в период с января по декабрь 2024 года. Группа исследования (n=35): циклы с применением АОА ионофором кальция (A23187, Sigma) после ИКСИ по медицинским показаниям (низкий процент оплодотворения в анамнезе). Контрольная группа (n=61): циклы со стандартной процедурой ИКСИ без применения активации. Критерии включения: возраст 18–43 лет, использование спермы партнёра, наличие полных данных о культивировании до 5-х суток. Для подготовки клеток и проведения ИКСИ использовали среды Vitrolife (Sweden). Клетки получали путём трансвагинальной аспирации фолликулов через 36–37 часов после триггера овуляции. После ИКСИ клетки выдерживали в среде с ионофором Ca²⁺ (концентрация 10 мМ) 8–10 минут при 6% CO₂, 5% O₂ и температуре +37°C. Для оценки качества эмбрионов использовали балльную систему, основанную на критериях Gardner et al. (1999), модифицированную с учётом дополнительных морфологических параметров.
Результаты. Основные параметры – частота оплодотворения, частота дробления и частота формирования бластоцист – не имели значимых отличий между группами (p>0,05). Существенное отличие отмечено только по среднему баллу эмбрионов на перенос (2,91±2,09 vs 3,98±1,41, p=0,008). Показатели частоты наступления клинической беременности, подтверждённой УЗИ (36,0% vs 30,4%), и частоты имплантации (27,3% vs 23,8%) оставались сопоставимыми (p>0,05). Выявлен клинически значимый тренд к снижению разницы между показателями беременности, установленной по определению положительного уровня ХГЧ, и частотой клинической беременности (4% vs 10,7% в контроле), что может свидетельствовать о более высокой компетенции эмбрионов в группе АОА и снижении ранних репродуктивных потерь.
Заключение. Искусственная активация ооцитов ионофорами кальция не приводит к статистически значимому улучшению основных эмбриологических показателей, но демонстрирует тенденцию к снижению разницы между биохимической и клинической беременностью, что может указывать на повышение качества эмбрионов у пациентов с неблагоприятным репродуктивным анамнезом. Для получения более достоверных выводов требуется накопление информации и проведение мультицентровых рандомизированных исследований с увеличенным объёмом выборки.

1. Smeenk J, Wyns C, Kupka M, et al. ART in Europe, 2020: results generated from European registries by ESHRE European IVF Monitoring Consortium (EIM) for the European Society of Human Reproduction and Embryology (ESHRE). Hum Reprod. 2024;39(6):1268–1285. https://doi.org/10.1093/humrep/deae080

2. Glatthorn HN, Decherney A. The efficacy of add-ons: selected IVF "add-on" procedures and future directions. J Assist Reprod Genet. 2022;39(4):827–838. https://doi.org/10.1007/s10815-022-02420-7

3. Vanden Meerschaut F, Nikiforaki D, De Roo C, et al. Assisted oocyte activation following ICSI fertilization failure. Reprod Biomed Online. 2012;24(6):621–631. https://doi.org/10.1016/j.rbmo.2012.02.010

4. Adamson GD, de Mouzon J, Chambers GM, et al. International Committee for Monitoring Assisted Reproductive Technology: world report on assisted reproductive technology, 2018. Hum Reprod. 2023;38(2):164–179. https://doi.org/10.1093/humrep/deac243

5. Kashir J, Ganesh D, Jones C, et al. Oocyte activation deficiency and assisted oocyte activation: mechanisms, obstacles and prospects for clinical application. Hum Reprod Open. 2022;2022(2):hoac003. https://doi.org/10.1093/hropen/hoac003

6. Ruan JL, Liang SS, Pan JP, et al. Artificial oocyte activation with Ca²⁺ ionophore improves reproductive outcomes in patients with fertilization failure and poor embryo development in previous ICSI cycles. Front Endocrinol (Lausanne). 2023;14:1244507. https://doi.org/10.3389/fendo.2023.1244507

7. Caglar Aytac P, Bulgan Kilicdag E, Haydardedeoglu B, et al. Can calcium ionophore "use" in patients with diminished ovarian reserve increase fertilization and pregnancy rates? A randomized, controlled study. Fertil Steril. 2015;104(5):1168–1174. https://doi.org/10.1016/j.fertnstert.2015.07.1157

8. Swann K, Yu Y. The dynamics of calcium oscillations that activate mammalian eggs. Int J Dev Biol. 2008;52(5-6):585–594. https://doi.org/10.1387/ijdb.072530ks

9. Backs J, Backs T, Neef S, et al. The delta isoform of CaM kinase II is required for pathological cardiac hypertrophy and remodeling after pressure overload. Proc Natl Acad Sci USA. 2009;106(7):2342–2347. https://doi.org/10.1073/pnas.0813013106

10. Madgwick S, Jones KT. How eggs arrest at metaphase II: MPF stabilisation plus APC/C inhibition equals cytostatic factor. Cell Div. 2007;2:4. https://doi.org/10.1186/1747-1028-2-4

11. Ducibella T, Fissore R. The roles of Ca²⁺, downstream protein kinases, and oscillatory signaling in regulating fertilization and the activation of development. Dev Biol. 2008;315(2):257–279. https://doi.org/10.1016/j.ydbio.2007.12.012

12. Kashir J, Deguchi R, Jones C, Coward K. Comparative biology of oocyte activation in mammals: new insights from the sperm factor paradigm. Reproduction. 2016;152(1):R1–R14. https://doi.org/10.1530/REP-16-0057

13. Nomikos M, Kashir J, Lai FA. The role and mechanism of action of sperm PLC-zeta in mammalian fertilisation. Biochem J. 2017;474(21):3659–3673. https://doi.org/10.1042/BCJ20160521

14. Yoon SY, Jellerette T, Salicioni AM, et al. Human sperm devoid of PLC, zeta 1 fail to induce Ca²⁺ release and are unable to initiate the first step of embryo development. J Clin Invest. 2008;118(11):3671–3681. https://doi.org/10.1172/JCI36942

15. Heytens E, Parrington J, Coward K, et al. Reduced amounts and abnormal forms of phospholipase C zeta (PLCζ) in spermatozoa from infertile men. Hum Reprod. 2009;24(10):2417–2428. https://doi.org/10.1093/humrep/dep207

16. Darwish E, Magdi Y. A preliminary report of successful cleavage after calcium ionophore activation at ICSI in cases with previous arrest at the pronuclear stage. Reprod Biomed Online. 2015;31(6):799–804. https://doi.org/10.1016/j.rbmo.2015.08.012

17. Ebner T, Oppelt P, Wöber M, et al. Treatment with Ca²⁺ ionophore improves embryo development and outcome in cases with previous developmental problems: a prospective multicenter study. Hum Reprod. 2015;30(1):97–102. https://doi.org/10.1093/humrep/deu285

18. Yakh′yarova M.P., Zastavskiy I.A., Nastupov A.V. Nastupleniye beremennosti i rody u patsiyentok posle korrektsii raspo-lozheniya pronukleusov v ootsitakh s ispol′zovaniyem ionofora kal′tsiya. Reproduktivnaya meditsina. 2022;3:87–92.

19. https://doi.org/10.37800/RM.3.2022.87-92 In Russian

20. Sfontouris IA, Kolibianakis EM, Lainas TG, et al. Clinical applications of artificial oocyte activation: a systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Hum Reprod Update. 2015;21(6):695–706. https://doi.org/10.1093/humupd/dmv034

21. Gardner DK, Lane M, Stevens J, Schlenker T, Schoolcraft WB. Blastocyst score affects implantation and pregnancy outcome: towards a single blastocyst transfer. Fertil Steril. 2000;73(6):1155–1158. https://doi.org/10.1016/s0015-0282(00)00518-5

22. Shurygina OV, Yuldasheva SZ, Ivanova OV, Demidova NN. Otsenka vyzhivayemosti vitrifitsirovannykh embrionov v zavisimosti ot stadii razvitiya. Journal of Biomimetics, Biomaterials and Biomedical Engineering. 2020;45:22–27. In Russian

23. ESHRE Special Interest Group of Embryology and Alpha Scientists in Reproductive Medicine. The Vienna consensus: report of an expert meeting on the development of ART laboratory performance indicators. Reprod Biomed Online. 2017;35(5):494–510. https://doi.org/10.1016/j.rbmo.2017.06.015

24. Alpha Scientists in Reproductive Medicine and ESHRE Special Interest Group of Embryology. The Istanbul consensus workshop on embryo assessment: proceedings of an expert meeting. Hum Reprod. 2011;26(6):1270–1283. https://doi.org/10.1093/humrep/der037

25. Ferraretti AP, Goossens V, Kupka M, et al. Assisted reproductive technology in Europe, 2009: results generated from European registers by ESHRE. Hum Reprod. 2013;28(9):2318–2331. https://doi.org/10.1093/humrep/det278

26. Montag M, Toth B, Strowitzki T. New approaches to embryo selection. Reprod Biomed Online. 2013;27(5):539–546. https://doi.org/10.1016/j.rbmo.2013.05.013